Ein Reinheitsprozentsatz sagt Ihnen, wie viel von einer Probe das Zielmolekül ist – aber nicht, ob sich dieses Zielmolekül wirklich im Fläschchen befindet. Die Massenspektrometrie beantwortet diese Frage. Diese Anleitung erklärt, wie es funktioniert und warum die beiden Messungen einander benötigen.
Massenspektrometrie wiegt Moleküle: Sie misst Masse-Ladungs-Verhältnis ionisierter Teilchen, daraus folgt das Molekulargewicht. Wenn das mit der Reihenfolge übereinstimmt, Identität wird bestätigt. Es wird kein Reinheitsprozentsatz ermittelt – das bleibt die Aufgabe der HPLC.
Was ist Massenspektrometrie?
Massenspektrometrie (MS) ist eine Technik, die Moleküle ionisiert und sie dann nach ihrem Masse-Ladungs-Verhältnis (m/z) sortiert. Das Ergebnis ist ein Spektrum: eine Reihe von Signalen entlang der m/z-Achse, wobei die Position eines Signals die Masse des entsprechenden Ions verrät.
Für Peptide wird typischerweise eine sanfte Ionisationstechnik verwendet, üblicherweise Elektrospray-Ionisation (ESI). Weich bedeutet, dass das Molekül in die Gasphase übergeht und eine Ladung aufnimmt, ohne auseinanderzufallen. Genau das, was Sie wollen, wenn es um das Molekulargewicht des intakten Peptids geht.
Wie folgt daraus ein Molekulargewicht?
Das Molekulargewicht wird aus den gemessenen m/z-Werten und der Anzahl der Ladungen zurückgerechnet und dann mit dem durch die Aminosäuresequenz implizierten Gewicht verglichen. Diese beiden müssen mit einem kleinen Spielraum übereinstimmen. Wenn Sie weiter abweichen, befindet sich etwas anderes als auf dem Etikett angegeben in der Durchstechflasche – oder nicht nur das.
Unter ESI nehmen Peptide oft mehr als eine Ladung auf, sodass dasselbe Molekül an mehreren Positionen im Spektrum erscheint: bei seiner Masse dividiert durch eine Ladung, durch zwei, durch drei. Das ist keine Kontamination, sondern eine Eigenschaft der Technik, und genau diese Reihe macht die Berechnung zuverlässig.
Das Molekulargewicht in den Angaben zu a Produktseite ist der theoretische Wert aus der Folge. Der Messwert für eine bestimmte Charge steht auf der Seite Zertifikat.
HPLC und MS: Was misst was?
Die beiden Techniken beantworten unterschiedliche Fragen und eine Charge wird erst charakterisiert, wenn beide Techniken durchgeführt wurden.
Deshalb enthält ein seriöses Analysezertifikat beides. Mehr zur Trennungsseite finden Sie hier Was ist HPLC?; Unsere Schwellenwerte sind aktiviert Qualitätsstandards.
Was Ihnen die Massenspektrometrie nicht verrät
Ein Massenspektrum kann keine Substanzen unterscheiden, die ein gemeinsames Molekulargewicht haben. Zwei Moleküle mit derselben Formel, aber unterschiedlicher Struktur – einschließlich einer Vertauschung der Aminosäurereihenfolge – wiegen genau das gleiche. Um dies zu durchschauen, ist eine Fragmentierung erforderlich, bei der das Molekül absichtlich auseinandergebrochen wird und die Fragmente die Sequenz offenbaren.
Und genau wie eine Reinheitsmessung sagt ein Spektrum nichts über Sterilität, Endotoxine oder Eignung für irgendeine Anwendung aus. Warum wir diese Messungen von einem Dritten durchführen lassen, erfahren Sie hier Janoshik Analytical; Überprüfen Sie eine bestimmte Charge über Überprüfen Sie eine Chargennummer.
Diese Informationen sind allgemeiner und informativer Natur. LYSENTA liefert Forschungspeptide Nur für Labor- und Forschungszwecke. Nicht für den menschlichen oder tierischen Verzehr bestimmt, kein Arzneimittel und kein medizinischer Rat.
Häufig gestellte Fragen zur Massenspektrometrie
Was bewirkt die Massenspektrometrie bei einem Peptid?
Massenspektrometrie misst das Masse-Ladungs-Verhältnis ionisierter Moleküle und leitet daraus das Molekulargewicht ab. Wenn das gemessene Gewicht mit dem durch die Aminosäuresequenz implizierten Gewicht übereinstimmt, ist dies die Bestätigung, dass sich das beabsichtigte Molekül in der Durchstechflasche befindet.
Was ist der Unterschied zwischen HPLC und Massenspektrometrie?
HPLC trennt die Bestandteile einer Probe und bestimmt, welcher Prozentsatz – wie viel – das Zielpeptid ist. Massenspektrometrie bestätigt molekulare Identität und Molekulargewicht – was. Sie messen unterschiedliche Dinge und ersetzen einander nicht.
Warum gibt es im Massenspektrum eines einzelnen Peptids mehrere Peaks?
Peptide nehmen während der Ionisierung häufig mehrere Ladungen auf. Ein Molekül erscheint dann an mehreren Stellen im Spektrum, jeweils mit seiner Masse dividiert durch die Anzahl der Ladungen. Aus dieser Reihe wird ein einzelnes Molekulargewicht zurückgerechnet.
Beweist die Massenspektrometrie die Reinheit eines Peptids?
Nein. Ein Spektrum bestätigt die Identität, kein Reinheitsprozentsatz. Zwei Stoffe mit gleichem Molekulargewicht lassen sich durch eine gewöhnliche Messung nicht unterscheiden. Die Reinheitszahl wird durch HPLC ermittelt.
